工作人员在实验结束后要对实验物品进行处理,分为以下2种情况:
情况1:如果物品不可回收,要把它包好,放入高压灭菌器内灭菌,然后带出实验室。如果物品可回收,要把它包好,放入高压灭菌器内灭菌,再转入洗刷间洗刷,然后进行回收。
情况2:如果物品为一次性的,要把它包好,放入高压灭菌器内灭菌,然后带出实验室。如果这种一次性物品不能高压灭菌,可以通过消毒剂进行浸泡消毒,然后按中心”三废”处理的有关规定执行操作。
辅料的质检应结合实际工作中可能用到的场景,并非越苛刻越好,需要每个实验室结合自身情况来设计和调整文中提到的参数。
1.离心管
(1)渗漏密闭性:将n个离心管加入半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。
(2)离心密闭性:将n个离心管加入半量纯水,放入离心机,10000 rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。
(3)热密闭性:将n个离心管加入半量纯水,盖好盖子称重后放入金属浴中,65℃或90℃(巴氏消毒),30min,再进行称重,离心管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。
(4)冷密闭性:将n个离心管加入半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。
(5)污染物质检:将n个离心管分别加入半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置5min,吸取纯水作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。
(6)抑制物质检:将n个离心管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min,然后进行提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板进行扩增,qPCR扩增未被抑制为合格。
PCR实验室设计的问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。
工作区域的严格划分,各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
合理的系统设置,合理的空调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统;严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。
规范的操作,临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,在实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。清洁工作及时、正确。实验工作结束后,必须立即对本区进行清洁。
严格的管理:严格控制进出实验室的人员。在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色),当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。扩增产物分析区是的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等。总之,实验室建设是一个复杂的问题,这里不讨论人员的问题,实验室人员的培养与沉淀,也需要一个过程,在建设的过程中要因地制宜,不要生搬硬套,结合自己的实际慢慢摸索出适合自己发展的建设思路。科学合理建设实验室,更好的发挥实验室的作用。